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净化

品系净化是指,通过特定处理,消除病毒、细菌和寄生虫,得到SPF级别动物的服务。维通达通过胚胎清洗和胚胎移植的方式,获得SPF级别的动物;同时委托第三方提供相关微生物检测服务,出具相关检测合格报告。


1.服务类别

净化服务,根据饲养环境不同分为两类:IVC净化和隔离器净化。根据净化级别,使用的代孕鼠和净化方案、设施均不同。常用的净化标准包括:(1)VAF/PLUS®;(2)GB-SPF;(3)VAF/ELITE®;(4)定制标准。

根据基因型不同,可以分为纯合净化或者杂合净化。纯合净化需要准备一定数量,基因型均为纯合的雌鼠和雄鼠;杂合净化只需要提供基因型符合需要的2~3只可育雄鼠即可。


2.服务简介

胚胎净化的目的是获得无特定病原体(Specific pathogen Free, SPF)动物,即体内无特定的微生物和寄生虫存在的动物。常用的方法包括剖腹产和胚胎移植,但由于剖腹产不能消除垂直传播的病毒(如鼠巨细胞病毒MCMV;淋巴细胞性脑膜炎病毒LCMV和脑胞内原虫ECUN),且对于手术设施依赖程度较大,目前通过胚胎移植的方法,消除病毒、细菌和寄生虫,是易行的品系净化方法。


胚胎净化的原理,是发育早期游离状态的胚胎有透明带,可以防止细菌、寄生虫和大部分病毒的侵袭;通过无限稀释的方法将透明带外面的微生物含量降至极低的水平,移植到代孕的健康小鼠体内后,小鼠的免疫系统会清除掉这些微生物,而达到净化的目的。国际胚胎移植协会推荐的标准,是在特定的培养液微滴中进行10次清洗,每次大约100倍的稀释。即便如此,仍有净化失败的风险,例如,鼠的细小病毒(MMV),有研究发现其可以通过透明带进入胚胎内部;有时采用的胚胎是通过体外受精(IVF),或透明带受到破坏的胚胎(如冷冻、解冻),这些情况需要采用不同的策略。研究发现,通过胚胎移植进行净化,胚胎的获取方法(雌鼠和雄鼠的准备)和胚胎处理(洗涤和培养)策略,会影响胚胎净化的结果[1~4]。胚胎获取的方法中,采用雄鼠(携带病原体)与同品系雌鼠(SPF)交配的方法获得胚胎,后代净化污染病原的风险很低;可以不需要对胚胎进行微生物分析,即杂合净化[2]。胚胎处理常用的方法是多次洗涤和一定时间的培养[1,3]。若胚胎是通过IVF,或透明带受到破坏的胚胎(如冷冻、解冻),需要对胚胎培养液进行分析,以确认是否有病原微生物的污染,这些净化后代需要每窝分别检测[4]。


为了确保净化成功,需要对净化的流程进行标准化控制(见图示)。①净化前,对净化品系的病原感染情况进行评估,如对清洗胚胎的溶液进行Q-PCR分析,确认病毒含量;②净化时,净化品系与SPF野生雌鼠交配获取胚胎,降低病毒通过透明带进入胚胎的概率;③净化后,对哨兵鼠或净化大小鼠进行微生物检测确认病原是否净化掉。由于从微生物感染到检测出来有一定的潜伏期,因而应根据具体的情况制定相应的策略。


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常用的净化标准有GB-SPF、FELASA、VAF/PLUS®和VAF/ELITE®等。检测的微生物项目越多,产生的检测费用也会越多。但是对于特定研究而言,也不是检测的项目越多越好,应根据实际的实验要求选择相应的标准。一般选择的原则是:免疫缺陷动物需要采用隔离器净化(排除环境菌);非免疫缺陷动物采用IVC净化即可(一般不需要排除环境菌)。IVC净化的代孕母鼠来自于屏障设施,隔离器净化代孕母鼠来自于隔离器,后者购鼠费用和饲养费用较高,特别是对于特殊品系,1个品系就需要使用1个隔离器3~4个月时间。我们可根据客户需求增加检测项目,费用根据检测项目增减。

通常情况下获得符合健康标准的动物模型,就可以排除微生物的干扰,进行扩繁或开始正式的实验。


参考文献:

[1] Risks of transmissible diseases in relation to embryo transfer. Reprod. Nutr. Dev. 41 (2001) 439–450

[2] Embryo Transfer Rederivation of C.B-17/Icr-Prkdcscid Mice Experimentally Infected with Mouse Parvovirus 1. Comparative Medicine. Vol 58, No 4 August 2008 Pages 353–359

[3] Rederivation by Embryo Transfer in Strains of Laboratory Mice and Rats. Russian Journal of Genetics: Applied Research. 2013, Vol. 3, No. 4, pp. 305–315

[4] www.jax.org/jaxmice/health Aligning Health Surveillance and Risk in Embryo Transfer, Embryo wash testing.

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